۱. جدا کردن آلودگیها توسط عصاره مواد آلی و هضم آنزیمی
این روش شامل افزودن فنل یا مخلوط ۱:۱ فنل و کلروفرم است که موجب رسوب پروتئینها میشوند اما نوکلئیک اسیدها محلول در آب باقی میمانند. در نتیجه با افزودن این محلول و سانتریفیوژ کردن، میتوان پروتئین را به صورت لایهای رسوبی و سفید رنگ بین لایههای آبی و آلی، جدا کرد. به طوری که پس از سانتریفیوژ محلول سه لایه میشود: لایهی بالایی شامل نوکلئیک اسیدها، لایهی میانی شامل پروتئینها و لایهی پایینی شامل فنل.
در برخی عصارهها، انقدر آلودگی پروتئین زیاد است که باید چندین بار استخراج با فنل صورت بگیرد اما اینکار ممکن است موجب خرد شدن مقداری از DNA شود، در نتیجه مطلوب نیست. در چنین شرایطی باید قبل از استخراج با فنل، با یک پروتئاز مثل پروناز یا پروتئیناز K تیمار شود تا پلیپپتیدها را به قطعات کوچکتر بشکند.
برخی RNAها مثل mRNA در تیمار با فنل جدا میشود اما اکثر آنها باقی میمانند. باید از آنزیم ریبونوکلئاز جهت حذف سریع RNA استفاده کرد.
برای ادامهی مراحل تخلیص DNA با همراه باشید.
کتاب کلون سازی ژن و آنالیز DNA : تی- اِ - براون ویراست هفتم پارت سیزدهم (قسمت اول)
گردآوری توسط کسری راستی
#تخلیص_DNA #براون #DNA #انستیتو_سنسوم #کسری_راستی
آیدی کانال:
https://t.center/BiologyWithK_R