تهیه محلول 5% از خون در تست Indirect Coombs شامل چندین مرحله است مواد و تجهیزات لازم نمک فیزیولوژیک (سالین) خون وریدی، یا در صورت لزوم سلول‌های قرمز خون (RBCs) لوله‌های آزمایش یا میکروتیوب‌های سانتریفیوژ پیپت سانتریفیوژ مراحل جمع‌آوری نمونه خون از بیمار نمونه خون وریدی بگیرید و درون یک لوله حاوی ماده ضد انعقاد مانند EDTA قرار دهید. سانتریفیوژکردن خون لوله را در سانتریفیوژ بگذارید و به مدت 5 تا 10 دقیقه با سرعت 1500 تا 2000 دور در دقیقه (rpm) بچرخانید تا سلول‌های قرمز خون از پلاسما جدا شوند. شستن سلول‌های قرمز خون پلاسما را به آرامی جدا کنید و دور بریزید. حجم خون باقی‌مانده را با نمک فیزیولوژیک بشویید. برای این کار، نمک فیزیولوژیک را به لوله اضافه کرده و مخلوط کنید. سپس دوباره سانتریفیوژ کنید و مایع بالای سلول‌ها را دور بریزید. این مرحله را دو یا سه بار تکرار کنید تا سلول‌های خون به خوبی شسته شوند. تهیه سوسپانسیون 5% مقدار مشخصی از سلول‌های قرمز خون شسته‌شده را به لوله آزمایش جدید منتقل کنید. به این سلول‌ها، نمک فیزیولوژیک اضافه کنید تا حجم کل مخلوط به گونه‌ای باشد که غلظت سلول‌های قرمز 5% شود. معمولاً برای تهیه سوسپانسیون 5%، 0.5 میلی‌لیتر سلول‌های قرمز در 9.5 میلی‌لیتر نمک فیزیولوژیک رقیق‌سازی می‌شود. میکس کردن محلول محلول را به آرامی هم بزنید تا دارا بودن غلظت یکنواخت تضمین شود. این سوسپانسیون 5% RBC اکنون آماده استفاده در تست Indirect Coombs می‌باشد